下一代全基因组人源化小鼠构建技术——TurboKnockout® 由尊龙凯时旗下的赛业生物研发，基于传统的胚胎干细胞（ES）靶向技术，推出了一项升级的TurboKnockout®基因编辑技术。该技术利用优化的纯合ES克隆打靶体系，能够高效筛选出基因敲除、敲入及点突变的纯合ES细胞。这一技术通过结合囊胚前注射和四倍体补偿技术进行显微注射，大大提高了Founder小鼠的嵌合状态，确保其达到100%嵌合，比起传统技术在嵌合体比例上的不稳定性这是一次显著的进步。此外，TurboKnockout®技术的基因编辑周期缩短至3个月，能够批量产生基因一致的纯合子小鼠。

为了验证TurboKnockout®技术的100%嵌合率，赛业生物进行了详细的实验流程。首先，构建出Rosa26安全位点过表达载体CAGLuciferaseEGFP质粒，并在C57BL/6N WT ES细胞上获得PCR正确的阳性克隆。接下来，通过流式细胞仪验证EGFP的正确表达。通过显微注射该阳性ES克隆，成功获得了优质的Founder小鼠，并通过常规传代获得纯合的F2代雄鼠。这些雄鼠与C57BL/6N WT雌鼠交配，生成可用于TurboKnockout®技术微注射的阳性受体胚胎。

注射C57BL/6N WT ES细胞的胚胎在125天时显示出显著的EGFP表达，与空扎胚胎形成了鲜明对比。通过流式细胞仪检测，结果表明，注射了C57BL/6N WT ES细胞的胚胎中，EGFP表达均匀，无阳性细胞泄露现象。此外，4周龄的Founder小鼠经过活体成像实验显示，注射的胚胎未出现Luciferase荧光泄漏，而空扎胚胎则明显发出强光。这些实验结果均表明TurboKnockout®技术的有效性与稳定性。

在进一步验证中，专家团队对注射C57BL/6N WT ES细胞的4周龄小鼠及125天胚胎中的多种组织进行PCR检测，结果显示注射的F0小鼠各组织及胚胎未检测到非目标条带，证实了其良好的基因型稳定性。

尊龙凯时的TurboKnockout®技术具有多种优势，首先是编辑类型的多样化，包括基因敲除、敲入及点突变等多方位的基因修饰。其次，在细胞阶段，可以通过多种方法来确保ES克隆打靶的准确性，如染色体核型鉴定、Southern Blot检测及qPCR验证等。此外，该技术还结合了专利的显微注射与四倍体补偿技术，确保所有F0代小鼠的基因型一致，且修饰效果稳定。最后，赛业生物提供多种基因品系选择，包括C57BL/6N Cya、C57BL/6J Cya等。

基于TurboKnockout®技术，赛业生物还构建了HUGO-GT®全基因组人源化小鼠模型，并为研究人员提供专业的CRO服务，支持眼科、神经、肿瘤免疫等疾病的深入研究。此外，针对全人源抗体药物开发的需求，赛业生物推出了HUGO-Ab®全人源抗体小鼠，拥有广泛的抗体序列多样性，以便于新药的开发。

总而言之，TurboKnockout®技术及其衍生的小鼠模型不仅为生物医疗领域提供了高效的研发平台，同时也为相关的药物开发与基础研究提供了坚实的技术支持，彰显出尊龙凯时在基因编辑领域的实力与承诺。