培养条件：气相环境为95%空气与5%二氧化碳，最佳温度设定为37℃。人黑色素瘤细胞A875来源于人类皮肤癌，广泛应用于肿瘤生物学研究、药物筛选及癌症机制探讨。这一细胞系经过STR（短串联重复序列）检测，保障其遗传特征的稳定性与真实度。

传代方法建议初次传代比例为1:2，操作后两天更换培养液。建议用户同时购买完培，以享受更多优惠。在接收细胞后，务必保持其良好状态，建议灌满完全培养液并妥善封口，以确保运输安全。收到细胞后，请勿立即打开瓶盖，及时检查培养瓶标记的细胞名称与订购内容是否一致，且确认瓶身无破损或漏液等异常情况。如果未发现漏液或污染，请在显微镜下观察细胞生长情况，并进行不同倍数的拍照（建议分别拍摄40x、100x、200x），前三天的照片是重要的售后依据。在未提供照片的情况下，默认细胞状态良好。

贴壁细胞的传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。若细胞大多数变圆并开始脱落，立即取出，轻轻敲打培养瓶后加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，于1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清后补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶传代（两个T25瓶），再补充至每瓶5-8ml的完全培养基，最后置入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞的传代步骤如下：

1. 使用半换液法时，将培养瓶竖置于培养箱中静置约1小时，轻轻吸去约3ml的培养基后，补充3ml的完全培养基。如果培养基变色缓慢，可以直接添加约500μl FBS。在传代时可直接加入5ml的培养基，分成两个培养瓶。一般情况下，传代3次后可进行一次离心传代，并去除死细胞。
2. 使用离心换液法则可先收集细胞悬液至离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清后补加1-2ml培养液进行重悬，并按1:2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml的新配置完全培养基以确保细胞的生长活力，此后传代可根据实际情况按1:2至1:5的比例进行。

细胞冻存步骤：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀的细胞加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存的细胞立即放入-80℃冰箱中，如需转移至液氮罐，请在-80℃冰箱保存24小时以上后再转入液氮中。

细胞复苏步骤：

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃，5%CO2的细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

尊龙凯时特别提醒：在运输过程中，有些细胞可能因粘附不牢而脱落，这是正常现象。如细胞脱落较多，可将培养瓶中的所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清作为过渡培养，并在沉淀中加入1-2ml胰酶，轻轻吹打以重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，重复离心步骤并重悬后按1:2比例分瓶传代（两个T25），补充新完全培养基至每瓶5-8ml，再放入37℃，5%CO2的培养箱中继续培养。

若细胞出现以下问题，可申请重发：运输途中细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等。细胞污染问题需在收到产品48小时内反馈真实实验结果，经确认后重发。常温发货的细胞如静置24小时后或干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内多数细胞存活不良，亦可申请重发，需提供真实清晰的细胞状态照片。其他可能导致的不予重发情况包括客户造成的细胞污染、不正确操作、非推荐的培养体系等。

请在收到细胞后的2天内及时反馈问题，以确保更快捷的服务。如有疑问，欢迎联系尊龙凯时技术支持团队。