尊龙凯时提供的细胞培养条件如下:气相为95%空气和5%二氧化碳,培养温度为37℃。尊龙凯时的人类横纹肌肉瘤细胞系A-673(STR)是一种广泛应用于癌症研究、肿瘤生物学和药物筛选的细胞系。通过短串联重复序列(STR)分析,该细胞系得到身份认证,以确保其遗传特征的稳定性和实验的可重复性。这使得A-673能够用于模拟横纹肌肉瘤的行为以及分子机制的研究。
传代方法
尊龙凯时建议在细胞传代时,第一次采用1:2的比例。传代过程中的细胞培养液需要每两天更换一次。建议用户在购买细胞时配套购买相关培养材料,可以享受更为优惠的价格。
细胞处理
收到细胞后,请勿立即打开培养瓶。及时核对培养瓶上的细胞名称,并确认其与订单一致。检查瓶子是否有破损或漏液现象。如未发现异常,使用显微镜观察细胞生长情况,并以不同放大倍数拍照保存(建议40x、100x、200x各一张)。前三天的照片将作为重要的售后依据,若未提供照片,将默认状态良好。
传代步骤
对于贴壁细胞的传代,步骤如下:
- 弃去培养上清,使用无钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
- 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中,放入37℃培养箱中消化1-2分钟。在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速加入5ml以上的完全培养基终止消化。
- 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出,将悬液转移至15ml离心管中,并在1000rpm条件下离心5分钟,弃去上清,再添加1-2ml完全培养基重悬。
- 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代,并补充新的完全培养基至每瓶5-8ml,最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
细胞冻存与复苏
在细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时,应进行冻存处理:
- 弃去培养液,并使用PBS洗涤细胞。
- 添加0.25%胰蛋白酶消化液,待细胞变圆后加入5ml完全培养液终止消化,并转移至离心管中离心。
- 弃去上清,将细胞重悬于1ml无血清冻存液中,混匀后加入冻存管中。
- 直接将冻存细胞放入-80℃冰箱,若需转入液氮罐中,则应在-80℃冰箱中存放24小时以上。
在细胞复苏时,从液氮中取出冻存管,快速置于37℃水浴中解冻,接着用75%酒精擦拭管外壁。将细胞移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中,并在1000rpm离心5分钟。最终,弃去上清后,重新用5ml完全培养基重悬,并接种至T25培养瓶中培养。更换新鲜完全培养基以继续培养细胞。
请注意, 尊龙凯时 不对因用户操作不当或外部条件导致的细胞问题负责。为确保实验的顺利进行,请遵循上述步骤,确保所有操作的准确性,以维护细胞的活力和实验结果的可靠性。