尊龙凯时提供的培养条件如下：气相配置为95%空气和5%二氧化碳，培养温度设定为37℃。在进行细胞传代时，建议首次按照1:2的比例进行传代，传代情况需要在2天后更换培养液。为了更好地处理细胞，建议同时购买，以享受到非常优惠的价格。收到细胞后请不要立即打开瓶盖，及时核对培养瓶上标注的细胞名称与订单是否一致，并检查瓶身是否有破损或漏液的现象。

若没有发现异常情况，可利用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片进行保存（推荐拍摄40x、100x及200x的各一张）。前三天的照片非常重要作为售后依据，若未提供照片则默认为已收到状态良好。

贴壁细胞传代步骤

1. 弃去培养液，用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。

2. 向培养瓶中添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，期间在显微镜下观察细胞消化情况。一旦细胞大部分变圆并开始脱落，迅速带回操作台，轻轻敲打培养瓶，添加5ml以上的完全培养基以终止消化。

3. 轻轻吹打以确保细胞完全脱落后，吸出细胞悬液，并将其转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬细胞。

4. 按照1:2的比例将细胞悬液进行分瓶传代（分为两个T25瓶），补充至每瓶5-8ml新的完全培养基，之后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

悬浮细胞传代步骤

1. 使用半换液法时，将培养瓶竖放，静置1小时，轻吸去约3ml培养基，再补加3ml的完全培养基。如培养基颜色变化不明显，可直接添加约500μl的FBS。传代时可以直接追加5ml培养基，分为两个培养瓶处理。一般情况下，经过3次传代后，可以选择进行离心传代，去除死细胞。

2. 离心换液法中，若需要分瓶，请将细胞悬液收集到离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清后补加1-2ml培养基进行重悬，再按1:2的比例分至新T25瓶中，并添加6-8ml按照说明书配置的新的完全培养基，以维持细胞的生长活力。后续传代可根据实际情况在1:2至1:5的比例间调整。

细胞冻存和复苏

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS洗涤细胞一次。

2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，倒置观察，待细胞收缩并变圆后，加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。

3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的无血清冻存液（请参见尊龙凯时产品编号 C7001），混匀后转移至冻存管中。

4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱储存，如需转入液氮罐，应在-80℃冰箱存放超过24小时。

细胞复苏操作

1. 将冻存管从液氮中取出（佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无冰晶，然后用75%酒精消毒冻存管外部。

2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。

3. 弃去上清，重悬细胞于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2的培养箱中继续培养。

4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

注意事项

细胞在运输过程中可能由于黏附不牢固而脱落，这是正常的现象。如脱落量较多，可将培养瓶内的所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养。随后对沉淀添加1-2ml胰酶，轻轻吹打以重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。

再次离心后，弃去上清，加1-2ml完全培养基重悬细胞，并按1:2比例进行分瓶传代（分为两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

问题处理标准

若细胞在运输过程中出现问题，如细胞丢失、瓶身破损或严重漏液，皆可申请重发。同时，对于污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果进行核实。请注意，常温运输的细胞在静置24小时后或干冰运输细胞复苏后24小时，如发现绝大多数细胞未存活，也可申请重发。

在收到产品7天之内，若细胞出现活性问题，需通过台盼蓝染色法鉴定细胞活力并提供结果以便重发。

不予重发的情况

若客户因操作不当导致的污染，或因不正确操作使细胞状态不佳，或因采用非推荐培养体系导致细胞状态不佳，均不予重发。此外，客户如未在细胞收到后的2天内反馈任何问题，也将不予重发。具体情况可由尊龙凯时团队进行进一步判定。