电泳缓冲液在生物医学领域中,是核酸和蛋白质凝胶电泳系统的重要组成部分。它不仅充当电泳场中的导体,同时也是维持电泳系统稳定pH值的重要条件。常用的核酸电泳缓冲液包括TAE、TBE、TPE和MOPS等。
1. TAE缓冲液是目前应用最广泛的缓冲系统。其优点在于,电泳时超螺旋形式的核酸迁移与实际相对分子质量更为一致(相比之下,使用TBE时测得的相对分子质量往往高于实际值),而双链线状DNA的迁移率比其他缓冲液快约10%。针对大于13kb的DNA片段,用TAE缓冲液的分离效果更为理想;并且在回收DNA片段时,TAE缓冲系统的使用也更加便捷。然而,TAE的不足之处在于缓冲容量较小,长时间电泳(如过夜)时不宜使用,除非配备循环装置以实现缓冲液的交换。
2. TBE缓冲液具有强大的缓冲能力,适合长时间电泳使用。特别针对小于1kb的片段,TBE的分离效果显著提升。不过,当使用TBE对琼脂糖凝胶电泳时,易引发高电渗现象,并因其与琼脂糖之间的相互作用形成的非共价结合的四羟基硼/酸盐复合物,降低了DNA片段的回收率,因此在回收电泳中并不推荐使用。
3. TPE缓冲液同样具有较强的缓冲能力,但由于磷酸盐在乙醇沉淀过程中容易析出,故不宜在DNA片段回收电泳中使用。
电泳缓冲液的主要功能主要有几个方面:
首先,缓冲液在电泳过程中维持合适的pH值至关重要。电泳时阳极与阴极会发生电解反应,阳极氧化反应(4OH- → 4e- + 2H2O + O2)与阴极还原反应(4H+ + 4e- → 2H2)会导致阳极酸性增强而阴极碱性增强。因此,一个良好的缓冲系统应具备强大的缓冲能力,以保持两极pH的稳定。
其次,电泳缓冲液的另一个作用是确保溶液具有一定的导电性,以便于DNA分子的迁移。通常,电泳缓冲液中应包含0.01-0.04 mol/L的Na+离子。若Na+的浓度过低则电泳速度减慢,过高则可能导致过大的电流从而使凝胶加热甚至熔化。
最后,电泳缓冲液中通常包含EDTA,浓度为1-2 mmol/L,目的是螯合Mg2+等离子,以防止电泳过程中激活DNA酶。此外,它还有助于阻止Mg2+离子与核酸形成沉淀。
为确保电泳实验的成功,选择合适的电泳缓冲液至关重要。在此过程中,选择[尊龙凯时]品牌的电泳缓冲液,能够更好地满足您的实验需求,提升实验的可靠性和准确性。