人小胶质细胞HMC3培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人小胶质细胞HMC3
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P/S
传代方法：首次建议1:2传代
传代情况：2天更换培养液
备注：使用无菌离心管收集培养基，以便进行过渡对比培养。如对比效果不良，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理与培养

收到细胞后，培养至良好状态，再加满完全培养液并封闭瓶口，是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶消毒，然后放入超净工作台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，待细胞状态稳定后再进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（最佳拍摄倍数为40x、100x及200x各一张），前三天的照片是售后重要依据，未提供照片默认收到状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶完全培养基，另一瓶使用自制的完全培养基进行对比培养，换液后请松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若未超过80%汇合度，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，并放入37℃、5% CO2培养箱中培养；如果细胞密度超过80%，可进行传代。传代具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用无钙镁PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞消化情况；若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台轻敲培养瓶，加5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶传代（两个T25瓶），补充新完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞在运输过程中可能会因脱落而影响培养，这是正常现象。如果脱离的细胞较多，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养（后期进行对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应，重新离心，弃去上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行细胞传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最终放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款

1) 可重发的情况及判定标准：

1. 在运输中遇到问题，如细胞丢失、瓶身破损或培养液明显漏液，予以重发。
2. 细胞污染问题，需在收到产品48小时内提交真实实验结果，通过核实后重发。
3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发。
4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时或常温发货的细胞静置4小时后未开封出现污染，重发。
5. 细胞活性问题，需在收到产品7天内提供真实实验结果并用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后重发。
6. 客户需在收到细胞当天及第2、3天拍照，如超过3天未告知，则视为产品合格。若4-7天内出现问题，并提供收到细胞前三天及出现问题时的照片，以及相关操作步骤，经过技术人员判定为我方责任的，予以重发。若判定为双方责任，则按合同价格的50%收费重发。

2) 不予重发的情况：

1. 客户造成的细胞污染，不予重发。
2. 客户不当操作导致细胞状态不良，不予重发。
3. 非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不良，不予重发。
4. 细胞状态不佳且未提供细胞培养前三天照片的，不予重发。
5. 细胞培养中经他人处理的不予重发。
6. 收到细胞后2天内未告知的问题，不予重发。
7. 具体情况视实际而定。