不久前，中国科学院上海免疫与感染研究所钟劲研究组在《Emerging Microbes & Infections》杂志上发表了一项关于拉沙病毒（Lassa virus, LASV）的重要研究成果，成功构建了一种新型的BSL-2级拉沙病毒反向遗传学操作系统。这一系统为研究拉沙病毒的完整生命周期及抗病毒药物的筛选提供了重要的工具。

拉沙病毒是一种高致病性病原体，能够引发严重的拉沙出血热，导致多系统损伤。由于其高致病性及高死亡率，美国疾控中心将其归类为A类生物恐怖病原。传统上，研究该病毒需要在生物安全四级（BSL-4）条件下进行。然而，BSL-4实验室的稀缺性和高昂的成本限制了对拉沙病毒的深入研究及抗病毒药物的开发。

钟劲研究团队开发的新型Lassa病毒反向遗传学系统，采用在辅助细胞系中表达病毒蛋白并转染病毒最小基因组RNA的方法，成功模拟了LASV的完整生命周期，且可在BSL-2级别的实验室中进行。

研究团队首先在Huh7细胞系中稳定表达拉沙病毒的NP、GP、Z和L蛋白，构建了辅助细胞系。随后，通过转染体外转录的拉沙病毒最小基因组RNA（minigenome），成功产生了一种缺陷型病毒颗粒LASVmg。这种颗粒仅保留了病毒复制、转录和组装所需的非编码序列，因而在自然状态下不具备感染性。

接下来，研究人员利用超速密度梯度离心法对LASVmg进行了纯化，分析其物理特性，评估其在细胞中的复制和传播能力。在样品准备过程中，团队通过离心和密度梯度分离技术，成功收集到不同馏分的病毒样品，并进行感染滴度的测定。

在实验中，CP80NX超速离心机发挥了关键作用，通过密度梯度离心技术，研究团队成功分离和纯化了Lassa缺陷型病毒颗粒（LASVmg），为后续的病毒特性分析和抗病毒研究奠定了重要基础。

此外，研究人员还采用CRISPRi技术敲低细胞中的α-DG和LAMP1，揭示了LAMP1在LASVmg感染中的关键作用，确认其为拉沙病毒侵入细胞所必需的胞内受体；与之前的研究相悖，胞外受体α-DG并不是病毒侵入所必需的。同时，该研究还证实了干扰素-α和利巴韦林对LASV的抗病毒作用，揭示了利巴韦林的抗病毒机制。

总体而言，钟劲研究团队设计的新型反向遗传学系统为科研人员在BSL-2实验室内开展拉沙病毒生命周期研究及抗病毒药物的筛选提供了重要的研究工具。这一创新成果不仅推动了对拉沙病毒的理解，也为开发有效的抗病毒策略奠定了坚实的基础。尊龙凯时始终关注生物医学领域的前沿研发，为推动公共健康事业贡献力量。